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即用型VitroCol,人去端胶原溶液涂层程序说明

2024-02-18

VitroCol,人去端胶原溶液是一种 3 mg/ml I 型人去端胶原溶液,用于 2D 和 3D 细胞培养,或作为胶原蛋白标准品。 VitroCol 胶原蛋白由人类新生儿成纤维细胞自然分泌,然后经过加工和纯化,产生天然产生的人类胶原蛋白。 VitroCol 设定了纯度标准(胶原蛋白含量 >99%)。 VitroCol 大约 97% 为 型人类胶原蛋白,其余为 III 型胶原蛋白。每个特定批次的浓度均在购买每个产品时提供的分析证书上提供。 VitroCol 是可溶于 0.01 N HCl 的去端肽胶原,因此 pH 值为 2。当涂覆表面、提供培养细胞薄层制剂或用作固体凝胶时,VitroCol 特别适合人类细胞培养系统。 VitroCol 人类胶原蛋白采用用户友好的包装提供,以便使用和储存。 VitroCol 经过无菌过滤,以即用型溶液形式提供。

 

 

艾美捷VitroCol,人去端胶原溶液ABM-5007-20ML储存/稳定性:

存放在2-10摄氏度,并在冷冻胶冻包装中发货。不要冷冻。产品标签和每个特定批次的分析证书上列有过期日期。当产品按照指示进行处理和存储时,过期日期有效。注意事项和免责声明本品仅供研发使用,不适用于人类或其他用途。请查阅有关危害和安全操作规程的材料安全数据表。

 

涂层程序说明:请将以下建议作为指导,以确定您培养系统的合适涂层条件。

1. 从瓶中取出所需量的胶原蛋白,放入稀释容器中。

2. VitroCol®稀释至约50100 μg/ml(约1:30)的水中。也可以使用0.01N盐酸溶液。

3. 轻轻搅拌混合物,直到完全混合。

4. 向培养表面添加适量稀释后的VitroCol®材料,确保整个表面都被涂层。

5. 在室温下盖好,孵育1-2小时。吸去任何剩余材料。或者,保持在室温下,直到表面干燥。

6. 孵育后,吸去任何剩余材料。

7. 用无菌培养基或PBS仔细冲洗涂层表面,避免划伤表面。

8. 涂层表面已经可以使用。如果保持无菌状态,也可以在2-8°C潮湿或风干保存。

 

3D凝胶制备程序:

1. 缓慢地将冷却的10PBS10倍培养基的1份加入到冷却的胶原溶液的8份中,轻轻搅拌。

2. 使用无菌0.1M氢氧化钠将混合物的pH调整至7.0-7.5。仔细监控pH调整(pH计、酚红或pH试纸)。

3. 使用无菌水将最终体积调整为10份。

4. 为防止凝胶化,保持混合物的温度在2-10°C

5. 要形成凝胶,加热至37°C。等待90120分钟使凝胶形成。

 

VitroCol,人去端胶原溶液部分文献参考:

1. Grinnell, F., Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices. Trends Cell Biol., 13, 264-269 (2003).

2. Beningo, K.A., et al., Responses of fibroblasts to anchorage of dorsal extracellular matrix receptors. Proc. Natl. Acad Sci. USA, 101, 18024-18029 (2004).

3. Zaman, M.H., et al., Migration of tumor cells in 3D matrices is governed by matrix stiffness along with cell-matrix adhesion and proteolysis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103, 10889-10894 (2006).

4. Jiang, H., and Grinnell, F., Cell-matrix entanglement and mechanical anchorage of fibroblasts in three-dimensional collagen matrices. Mol. Biol. Cell, 16, 5070-5076 (2005).

5. Heino, J., The collagen receptor integrins have distinct ligand recognition and signaling functions. Matrix Biol., 19, 319-323 (2000).

6. Heino, J., The collagen family members as cell adhesion proteins. BioEssays, 29, 1001-1010 (2007).

7. Ivaska, J., et al., Cell adhesion to collagen-is one collagen receptor different from another? Conn. Tiss., 30, 273-283 (1998).