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Advanced BioMatrix 鼠尾胶原蛋白溶液,I 型,(2D 细胞培养)的无菌操作要点

2024-02-07

Advanced BioMatrix提供RatCol®胶原溶液,其高度纯化的尾端胶原浓度约为4 mg/mLpH值为3-4,并经过无菌过滤。RatCol®约占97%的胶原为Ⅰ型胶原,其余为Ⅲ型胶原。RatCol®胶原的纯度≥99%SDS-PAGE电泳显示胶原的典型α、β和γ条带模式。实际的胶原浓度会印在产品标签和每个特定批次的分析证书上。RatCol®是通过酸提取工艺从0.2M醋酸缓冲液中提取得到的保留有无肽胶原。胶原链的两端,即N-末端和C-末端的前肽区域,被保留。

 

Ⅰ型胶原是皮肤、骨骼、肌腱和其他纤维结缔组织的主要结构成分,与其他胶原蛋白不同之处在于其赖氨酸羟基化和低碳水化合物含量较低。虽然已经鉴定出多种类型的胶原蛋白,但它们都由三肽链分子组成,呈三螺旋构象。主要结构(氨基酸序列)中的细微差异确定了不同类型之间的差异。主要结构的氨基酸序列主要是以甘氨酸为每三个位置的重复基序,丙氨酸或4-羟基脯氨酸经常位于甘氨酸残基之前。Ⅰ型胶原是由两个α1(I)链和一个α2(I)链组成的异源三聚体,在中性pH37°C下自发形成三螺旋支架。

 

多细胞生物中的细胞生长、分化和凋亡的控制依赖于细胞与细胞外基质(ECM)的粘附。鉴于Ⅰ型胶原是ECM的丰富组分,细胞在三维胶原凝胶中培养比传统的二维系统更好地模拟体内细胞环境。这已经在多种细胞类型中得到证实,包括心脏和角膜成纤维细胞、肝星状细胞(HSCs)和神经母细胞瘤细胞。一些疾病可以影响ECM的力学特性,而其他疾病状态可能是由于ECM的密度或刚度变化引起的。由于Ⅰ型胶原是ECM张力特性的关键决定因素,三维胶原凝胶在机械传导和细胞信号转导的研究中非常有用,涉及将机械信号转化为生化信号的过程。

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不同的胶原亚型被一组结构和功能多样的细胞表面受体所识别,这些受体识别胶原三螺旋。比较耳闻能详胶原受体是整合素α1β1和α2β1。α1β1是平滑肌细胞上的主要整合素,而α2β1是上皮细胞和血小板上的主要形式。这两种形式在包括成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和淋巴细胞在内的许多细胞类型上表达。某些细胞类型还可能表达其他胶原受体,如糖蛋白VIGPVI),它在血小板中介导粘附和信号传导。其他胶原受体包括圆盘结构域受体、白细胞相关的免疫球蛋白样受体1以及曼诺糖受体家族的成员。这个产品是从大鼠尾腱中提取的胶原制备而成,并含有高单体含量。起始材料来自管理的Sprague Dawley大鼠群体,并使用符合cGMP的制造工艺进行纯化。该过程包含内置的、经过验证的步骤,以确保可能存在的朊病毒和/或病毒污染物的灭活。该产品非常适用于涂覆表面,提供用于培养细胞的薄层制备。

 

艾美捷Advanced BioMatrix 鼠尾胶原蛋白溶液,型,4 mg/ml20 mL2D 细胞培养)ABM-5056-20ML):

储存/稳定性:该产品存放在2-10°C,并在冷冻凝胶包装中运输。请勿冷冻。产品标签和每个特定批次的分析证书上列有到期日期。当产品按照指示处理和储存时,到期日期有效。

涂层操作步骤:

注意:在制备和处理胶原和其他溶液的过程中,采用无菌操作以保持产品的无菌性。

1. 将所需体积的胶原溶液从瓶中转移到稀释容器中(如果需要)。使用无菌的0.1%醋酸溶液进一步稀释至所需浓度。典型的工作浓度范围为50100 μg/ml

注意:使用这些建议作为指导,确定您的培养系统的最佳涂层条件。

2. 将适量稀释后的Rat Tail胶原加入培养表面。

3. 在室温或37°C下,盖上,孵育1-2小时。

4. 孵育结束后,吸去任何剩余物质。

5. 用无菌培养基或PBS仔细冲洗涂层表面,避免划伤表面。

6. 涂层表面已准备好使用。如果保持无菌性,也可以湿润或风干后存放在2-8°C

 

仅用于科研,不可用于临床诊断。

 

美国Advanced BioMatrix3D组织培养、细胞检测和细胞增殖等领域实验解决方案的佼佼者,在分离、纯化、冻干、细胞培养和蛋白检测、多肽粘附、附着因子、基质硬度和其他3D matrix 产品开发方面有着丰富的经验。

 

https://www.amyjet.com/products/ABM-5056-20ML.shtml